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Elisa試劑盒在實驗前需要做哪些準備工作?
發布時間:2022-03-08   點擊次數:211次
  Elisa試劑盒實驗中為了確定較佳信號和背景應將捕獲抗體(0.5-4μg/ml)和檢測抗體(0.25-2μg/ml)在預實驗中進行彼此相抗的滴定。同時,應包括在適當范圍內的標準品的系列稀釋。按試劑說明書常規提供的范圍進行操作。
 
  標準品的配制:對于每種細胞因子應仔細閱讀說明書,注意每批的細節。在使用細胞因子前,瞬時離心試劑瓶,盡可能多地收回其中的細胞因子。根據每批說明書中的細節,將凍干的細胞因子復溶。
 
  Elisa試劑盒實驗前需做的準備工作:
 
  1. 各種實驗儀器及材料,如微量移液器,吸頭,醫用蒸餾水等。
 
  2. 提醒您應將盒內各試劑取出,室溫放置至少30分鐘。
 
  3. 應用樣品稀釋液來稀釋樣品,按照1:100的體積比來稀釋樣品如10μl的樣品加入到1ml的應用樣品稀釋液中,充分混勻待用。
 
  4. 濃縮洗液與醫用蒸餾水1:19倍稀釋后成為應用洗滌液;
 
  5. 濃縮樣品稀釋液與醫用蒸餾水1:4倍稀釋成應用樣品稀釋液。
 
  6. 使用之仔細閱讀說明書,按說明書確定所有試劑齊全(數量、體積)。
 
  7. 確定試劑盒是否在有效期內。
 
  8. 根據檢測標本數量確定所需試劑的量。
 
  9. 標本制備要規范,每份標本體積要按2-3個復孔以上的量制備(貯存),盡量分裝做備份。短期內無法實驗者,注意低溫保存。
 
  組成結構:
 
  1、 血清:操作過程中避免任何細胞刺激。使用不含熱原和內毒素的試管。收集血液后,1000×g離心10分鐘將血紅細胞迅速小心地分離。
 
  2、 血漿:EDTA、檸檬酸鹽、肝素血漿可用于檢測。1000×g離心30分鐘去除顆粒。
 
  3、 細胞上清液:1000×g離心10分鐘去除顆粒和聚合物。
 
  4、 組織勻漿:將組織加入適量生理鹽水搗碎。1000×g離心10分鐘,取上清液。
 
  5、 保存:如果樣品不立即使用,應將其分成小部分-70℃保存,避免反復冷凍。盡可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量顆粒,檢測前先離心或過濾。不要在37℃或更高的溫度加熱解凍。應在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。
 
  此IBL試劑盒能用于小鼠血清,EDTA血漿,細胞上清中白介素-6的定量檢測
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