如何使用雙抗體夾心法檢測未知抗原

　　ELISA是以免疫學反應為基礎，將抗原、抗體的特異性反應與酶對底物的高效催化作用相結合起來的一種敏感性很高的實驗技術。由于抗原、抗體的反應在一種固相載體-聚苯乙烯微量滴定板的孔中進行，每加入一種試劑孵育后，可通過洗滌除去多余的游離反應物，從而保證試驗結果的特異性與穩定性。
 

　　ELISA試劑盒如何使用雙抗體夾心法檢測未知抗原：
 

　　1、用緩沖液將抗體稀釋至1-10ug/ml。在反應孔中加0.1ml，4℃過夜。次日，棄去孔內溶液，用洗滌緩沖液洗3次。
 

　　2、加樣：加一定稀釋的待檢樣品0.05ml于上述已包被之反應孔中，置37℃孵育1小時。然后洗滌(同時做空白孔，陰性對照孔及陽性對照孔)。
 

　　3、加酶標抗體：于各反應孔中，加入新鮮稀釋的酶標抗體(經滴定后的稀釋度)0.05ml。37℃孵育0.5～1小時，洗滌。
 

　　4、加底物液顯色：于各反應孔中加入臨時配制的TMB底物溶液0.1ml，37℃10～30分鐘。
 

　　5、終止反應：于各反應孔中加入2M硫酸0.05ml
 

　　6、結果判定：可于白色背景上，直接用肉眼觀察結果：反應孔內顏色越深，陽性程度越強，陰性反應為無色或極淺，依據所呈顏色的深淺，以“+”、“-”號表示。也可測OD值：在ELISA檢測儀上，于450nm(若以ABTS顯色，則410nm)處，以空白對照孔調零后測各孔OD值，若大于規定的陰性對照OD值的2.1倍，即為陽性。