ELISA檢測試劑盒實驗條件的選擇

　　在ELISA中，進行各項實驗條件的選擇是很重要的，其中包括:

　?。?）包被抗體（或抗原）的選擇：將抗體（或抗原）吸附在固相載體表面時，要求純度要好,吸附時一般要求PH在9.0～9.6之間。吸附溫度，時間及其蛋白量也有一定影響,一般多采用4℃18～24小時。蛋白質包被的適濃度需進行滴定：即用不同的蛋白質濃度（0.1、1.0和10μg/ml等）進行包被后，在其它試驗條件相同時，觀察陽性標本的OD值。選擇OD值大而蛋白量少的濃度。對于多數蛋白質來說通常為1～10μg/ml。

　?。?）固相載體的選擇：許多物質可作為固相載體，如聚氯乙烯、聚苯乙烯、聚丙酰胺和纖維素等。其形式可以是凹孔平板、試管、珠粒等。常用的是40孔聚苯乙烯凹孔板。不管何種載體，在使用前均可進行篩選：用等量抗原包被，在同一實驗條件下進行反應，觀察其顯色反應是否均一性，據此判明其吸附性能是否良好。

　?。?）酶的底物及供氫體的選擇：對供氫體的選擇要求是價廉、安全、有明顯地顯色反應，而本身無色。有些供氫體（如OPD等）有潛在的致癌作用，應注意防護。有條件者應使用不致癌、靈敏度高的供氫體，如TMB和ABTS是較為滿意的供氫體。底物作用一段時間后，應加入強酸或強堿以終止反應。通常底物作用時間，以10-30分鐘為宜。底物使用液必須新鮮配制，尤其是H2O2在臨用前加入。

　?。?）酶標記抗體工作濃度的選擇：首先用直接ELISA法進行初步效價的滴定（見酶標記抗體部份）。然后再固定其它條件或采取“方陣法”（包被物、待檢樣品的參考品及酶標記抗體分別為不同的稀釋度）在正式實驗系統里準確地滴定其工作濃度。

　　ELISA檢測試劑盒實驗禁忌：

　　1、濃洗滌液可能會有結晶析出，試劑盒稀釋時可在水浴中加溫助溶，洗滌時不影響結果。

　　2、本試劑不同批號組分不得混用。顯色劑B請避光保存。

　　3、如標本中待測物質含量過高（樣本OD值大于標準品孔第1孔的OD值），請先將樣本稀釋一定倍數（n倍）后再測定，計算時請zui后乘以稀釋倍數（×5×n）。

　　4、封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。

　　5、嚴格按照說明書的操縱進行，試劑盒試驗結果判定必須以酶標儀讀數為準.

　　6、從冷躲環境中取出應在室溫平衡15-30分鐘后方可使用，酶標包被板開封后如未用完，板條應裝進密封袋中保存。

　　7、所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。

　　8、各步加樣均應使用加樣器，并經常校對其正確性，以避免試驗誤差。一次加樣時間控制在5分鐘內，如標本數目多，推薦使用排槍加樣。