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ELISA檢測試劑盒實驗條件的選擇
發布時間:2020-03-13   點擊次數:1256次
   Elisa生物試驗是一種敏感性高,特異性強,重復性好的實驗診斷方法。由于其試劑穩定、易保存,操作簡便,結果判斷較客觀等因素,已廣泛應用在免疫學檢驗的各領域中。ELISA檢測試劑盒適用于體外定性檢測人血清或血漿中的抗人類戊型肝炎(HEV)病毒IgM抗體ELISA檢測。
  在ELISA中,進行各項實驗條件的選擇是很重要的,其中包括:
 ?。?)包被抗體(或抗原)的選擇:將抗體(或抗原)吸附在固相載體表面時,要求純度要好,吸附時一般要求PH在9.0~9.6之間。吸附溫度,時間及其蛋白量也有一定影響,一般多采用4℃18~24小時。蛋白質包被的適濃度需進行滴定:即用不同的蛋白質濃度(0.1、1.0和10μg/ml等)進行包被后,在其它試驗條件相同時,觀察陽性標本的OD值。選擇OD值大而蛋白量少的濃度。對于多數蛋白質來說通常為1~10μg/ml。
 ?。?)固相載體的選擇:許多物質可作為固相載體,如聚氯乙烯、聚苯乙烯、聚丙酰胺和纖維素等。其形式可以是凹孔平板、試管、珠粒等。常用的是40孔聚苯乙烯凹孔板。不管何種載體,在使用前均可進行篩選:用等量抗原包被,在同一實驗條件下進行反應,觀察其顯色反應是否均一性,據此判明其吸附性能是否良好。
 ?。?)酶的底物及供氫體的選擇:對供氫體的選擇要求是價廉、安全、有明顯地顯色反應,而本身無色。有些供氫體(如OPD等)有潛在的致癌作用,應注意防護。有條件者應使用不致癌、靈敏度高的供氫體,如TMB和ABTS是較為滿意的供氫體。底物作用一段時間后,應加入強酸或強堿以終止反應。通常底物作用時間,以10-30分鐘為宜。底物使用液必須新鮮配制,尤其是H2O2在臨用前加入。
 ?。?)酶標記抗體工作濃度的選擇:首先用直接ELISA法進行初步效價的滴定(見酶標記抗體部份)。然后再固定其它條件或采取“方陣法”(包被物、待檢樣品的參考品及酶標記抗體分別為不同的稀釋度)在正式實驗系統里準確地滴定其工作濃度。
  ELISA檢測試劑盒實驗禁忌:
  1、濃洗滌液可能會有結晶析出,試劑盒稀釋時可在水浴中加溫助溶,洗滌時不影響結果。
  2、本試劑不同批號組分不得混用。顯色劑B請避光保存。
  3、如標本中待測物質含量過高(樣本OD值大于標準品孔第1孔的OD值),請先將樣本稀釋一定倍數(n倍)后再測定,計算時請zui后乘以稀釋倍數(×5×n)。
  4、封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。
  5、嚴格按照說明書的操縱進行,試劑盒試驗結果判定必須以酶標儀讀數為準.
  6、從冷躲環境中取出應在室溫平衡15-30分鐘后方可使用,酶標包被板開封后如未用完,板條應裝進密封袋中保存。
  7、所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。
  8、各步加樣均應使用加樣器,并經常校對其正確性,以避免試驗誤差。一次加樣時間控制在5分鐘內,如標本數目多,推薦使用排槍加樣。
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